Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
В контейнерах с подходящей жидкой питательной средой (например, с питательным бульоном А) выращивают по отдельности бактериальные тест-культуры при температуре от 300С до 350С в течение 18-24 часов. На подходящих агаризованных средах (например, на среде С без антибиотиков # или среде №2) выращивают по отдельности тест-культуры грибов. Candida albicans, инкубируют при температуре от 200С до 250С в течение 48 часов, а Aspergillus niger - при температуре от 200С до 250С в течение 7 дней.
Staphylococcus aureus например, АТСС 6538 (NCIMB 9518, CIP 4.83)
# или ATCC 6538 P
Escherichia coli например, ATCC 8739 (NCIMB 8545, CIP 53.126)
# или АТСС 25922
Bacillus subtilis например, ATCC 6633 (NCIMB 8054, CIP 52.62)
Candida albicans например, ATCC 10231 (NCPF 3179, IP 48.72),
# или АТСС 885-653
Aspergillus niger например, ATCC 16404 (IMI 149007, IP 1431.83)
# или ВКМ F-1119
Порции каждой из культур разбавляют буферизированным раствором хлорида натрия и пептона рН 7,0, получая тест-суспензии, содержащие около 100 жизнеспособных микроорганизмов в миллилитре. Используют суспензию каждого из микроорганизмов по отдельности в качестве контроля методов подсчета в присутствии и отсутствии испытуемого продукта. При проверке метода мембранной фильтрации или чашечного подсчета результат подсчета для каждого из тест-штаммов не должен отличаться более, чем в пять раз, от значения, вычисленного для посевного материала. При проверке метода наиболее вероятного числа значение, вычисленное для посевного материала, должно находиться в пределах 95% доверительного интервала для полученных результатов. Для проверки стерильности среды и растворителя, а также контроля условий асептики при проведении испытания, выполняют определение тем же методом с использованием в качестве испытуемого препарата стерильного буферизированного раствора хлорида натрия и пептона рН 7,0. Роста микроорганизмов наблюдаться не должно.
# Тест-культуры бактерий можно выращивать на скошенной в пробирках плотной питательной среде подходящего состава, например, среде №1. Для получения тест-суспензии выращенные в пробирках культуры смывают раствором натрия хлорида 0,9% и разводят этим же раствором до нужного содержания клеток в миллилитре.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
За общее число бактерий принимают среднее количество колониеобразующих единиц, обнаруженных на агаризованной среде В # или среде №1. За общее число грибов принимают среднее количество колониеобразующих единиц,
обнаруженных на агаризованной среде С # или среде №2. Суммарное количество жизнеспособных аэробов представляет собой сумму числа бактерий и числа грибов, определенных выше. Если имеются доказательства роста на обеих средах микроорганизмов одинаковых типов, могут быть внесены соответствующие поправки. Если подсчет выполнен методом наиболее вероятного числа, то вычисленное значение представляет собой количество бактерий.
При использовании трехуровневого плана отбора проб поступают следующим образом.
Определяют общее число микроорганизмов отдельно для каждого из пяти образцов. Считают, что субстанция или готовое лекарственное средство удовлетворяет требованиям по микробиологической чистоте, если выполняются следующие условия:
(i) - общее число микроорганизмов, определенное для каждого испытуемого образца, не превышает допустимый уровень больше чем в 10 раз (отсутствуют бракованные образцы),
(ii) - не более чем для двух испытуемых образцов общее число микроорганизмов, определенное в результате испытания, находится в интервале между допустимым уровнем и десятикратным значением (то есть не более двух предельных образцов).
Использование трехуровневого плана отбора проб должно быть предусмотрено в частной статье.
Если в частной статье предписано максимальное значение, оно должно интерпретироваться следующим образом:
2 2
102 микроорганизмов - максимально допустимое значение: 5х102;
3 3
103 микроорганизмов - максимально допустимое значение: 5х103; и т.д.
# Если при испытании образца методом мембранной фильтрации при разведении лекарственного средства 1:10 не выявлен рост микроорганизмов на мембранных фильтрах, результаты выражают следующим образом: «В 1 г (мл) лекарственного средства (сырья) бактерии (грибы) не выявлены».
# В том случае, если при испытании образца методом высева на чашки при разведении лекарственного средства 1:10 не выявлен рост микроорганизмов на чашках, результаты отмечают следующим образом: «В 1 г (мл) лекарственного средства (сырья) менее 10 бактерий».
# Если в частной статье приведены допустимые пределы содержания микроорганизмов, результаты интерпретируют следующим образом:
